2022年4月26日，Springer Nature出版的Methods in Molecular Biology系列丛书Extracellular Vesicles in Diagnosis and Therapy在线发表了中国科学院上海营养与健康研究所杨黄恬研究组题为“Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles Secreted from Human Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiovascular Progenitor Cells”的工作。该工作介绍了从人多能干细胞源心血管前体细胞（hPSC-CVPCs）条件培养基中高效分离细胞外囊泡（EVs）及其特征鉴定的方法。

　　心肌梗死（心梗）及其导致的心力衰竭（心衰）是心血管疾病的主要致死原因，严重威胁人类健康。近年我们和其它实验室的临床前研究证明移植hPSCs衍生心血管细胞可有效改善心梗后心功能、缩小纤维疤痕，其机制与旁分泌介导的促进心肌细胞存活和增殖、血管新生和抑制心肌病理性重构有关，其中EVs发挥着重要作用。我们组前期工作发现hCVPC-EVs有效减少心梗后心肌细胞凋亡、促进血管生成和减少纤维疤痕形成、改善心脏功能。EVs的生物学功能除了依赖于其母细胞性质外，与其分离方法密切相关。不同分离方式可影响EVs纯度、活性、生物学特征及应用疗效。因此，如何快速、高效获得高纯度、高活性的EVs是进行EVs功能和修复机制研究的前提条件。

　　本工作描述了一种从hPSC-CVPCs条件培养基中获得EVs的高效分离和特征鉴定方法。本方法收集的hPSC-CVPCs条件培养基，通过高速离心去除死细胞、细胞碎片和其他大颗粒物质，最后通过超速离心收集获得hCVPC-EVs。获得的hCVPC-EVs呈现典型的双分子层囊泡结构，大小在110-118纳米左右，纯度高，表达典型EVs的标记蛋白，包括Alix、TSG101、CD63、CD9和CD81。相较于试剂盒法等其它分离方法，该方法通量大、操作简单、可分离得到大小均一、纯度高的EVs。我们的研究证明通过该法获取的EVs适合进行后续的一系列体内、外包括动物疾病模型的研究，hCVPC-EVs心肌注射可有效促进心梗心肌修复。因此，本方法为大量、高纯度的EVs的获取提供了一种方案。

　　Extracellular Vesicles in Diagnosis and Therapy一书由Maurizio Federico和Barbara Ridolfi主编。该书详细介绍了从小鼠到人体、从细胞培养基到体液、从干细胞到癌症细胞等不同来源的EVs分离、检测和分析方法。第一章介绍了EVs的检测和分离方法；第二章介绍了从不同组织、器官或体液中分离和鉴定EVs方法，包括胎盘、hPSC-CVPCs、唾液和尿液来源；第三章介绍了EVs内含物的分析方法，包括对EVs中miRNA、磷酸化蛋白质组学、脂质组学的鉴定分析；第四章介绍了EVs的工程化改造，包括利用荧光蛋白标记EVs，EVs作为递送载体等。该书提供的EVs相关详细资料，包括完整的材料和试剂列表、可重复的详细的实验步骤，以及实验中可能碰到的问题及解决方法，对EVs的研究及转化应用具有重要的科学意义和实用价值。

　　杨黄恬研究员为该文通讯作者，博士研究生吴强为第一作者。该工作得到科技部国家重点研发计划“干细胞及转化研究专项”、中国科学院先导计划、国家自然科学基金委项目、张江国家自主创新示范区专项发展资金重点项目的支持。

图. 书的封面及protocol题目

原文链接：https://link.springer.com/protocol/10.1007/978-1-0716-2341-1_7